电光源生物显微镜的折射和折射率光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以直线传播，当通过不同密度介质的透明物体时，则发生折射现像，这是由于光在不同介质的传播速度不同造成的。当与透明物面不垂直的光线由空气射入透明物体(如玻璃)时，光线在其介面改变了方向，并和法线构成折射角。
要想测出被检物长度，需要用到两个工具，其中一块装在目镜中，被称为目镜测微尺；一块放在生物显微镜载物台上，是一块特殊的盖玻片，可以看到在它的中间有一小的圆形区域，里面刻有很小的刻度，一般的总长度为1mm，总共100个小格，也就是每个小格之间距离为10um，它的作用是确定目镜测微尺在生物显微镜观察下每格代表的长度。
在使用时需要先把目镜测微尺装入目镜筒中，具体操作为：
先把目镜从显微镜上拔下来，在远离镜片的一端有个齿轮状的圆形结构，把它拧开，然后把目镜测微尺装入其中，注意正面要放于视场光阑上，然后将其拧回去，放回目镜就行了。有的电光源生物显微镜由于结构精密，不允许拆卸，需专门配有测微尺的目镜。然后将测微台尺放于载物台上，调节显微镜焦距知道能看到台尺清晰的刻度为止。这时调整让两尺子的一端在整刻度重合，然后寻找另一端在什么地方重合，数出重叠部分的格数就能算出目镜测微尺在放大情况下的实际倍率了。
具体计算公式如下：
目镜测微尺每格=（台尺重叠数X10）/目尺重叠格数。
确定好目镜测微尺每格代表的长度后移开台尺，之后使用时就能用它确定被检物实际长度了。由于电光源生物显微镜有多个物镜，每个物镜放大倍率不同，目镜测微尺在不同倍率下所代表的实际长度不同，因此在切换倍率时应重新校准。
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