分光光度计日常分析工作中,经常遇到的问题是同一个样品在不同仪器上得到的吸收测量值不相同,有时,它们之间的差别往往超过允许公差范围,增加了生产部门和检验部门的矛盾。为此,要得到精确的测量结果,就必须充分了解仪器的主要参数对吸收测量的影响。影响测量结果的主要参数有波长精度、杂散光、噪声、基线平直度以及光谱带宽,下面一一进行介绍。分光光度计 1、波长准确度
波长准确度在确保紫外可见分光光度计的准确度中起着十分重要的作用。因为测试样品物质不同,那么它对不同波长的光有着不同的摩尔吸光系数。由朗伯比尔定律可知,不同的摩尔吸光系数所对应的吸光度会有差异,由此就会产生不一致的分析误差。
2、杂散光
杂散光是准确度分析误差的一个重要来源,直接影响着样品物质在测试时所能配制的zui大浓度。有研究结果表明,越高浓度的测试样品杂散光的影响越大,如果是在一个比较大的浓度下,杂散光增强,吸光度和浓度成比例的范围缩小。
3、噪声
影响紫外可见分光光度计光度准确度的噪声包括光噪声和电噪声。其中光噪声是由光源产生的,具体来说就是光源的发光强度分布因子导致光噪声的出现。电噪声的来源是光电倍增管、各种电源以及放大器等。作为紫外可见分光光度计光度准确度zui关键的技术参数之一,噪声是分析测试中主要误差源头,它是影响紫外可见分光光度计光度准确度检测下限的因素。
4、基线平直度
基线平直度是全波段内每个波长上的噪声体现,基线平直度直接影响紫外可见分光光度计光度准确度的灵敏度以及影响检测下限或使用范围,是紫外可见分光光度计中一个十分重要的技术参数。购买者和使用者在选购和使用紫外可见分光光度计的时候,对基线平直度会有这特别的重视程度,会作为选购和使用的重要技术指标。但是相对于其他影响紫外可见分光光度计光度准确度的因素来说,基线平直度是受到目前国内外研究工作者重视程度远远不够的技术指标。
5、光谱带宽
光谱带宽是影响紫外可见分光光度计光度准确度的一个十分重要的因素。当光谱带宽不同时,测试得到的数据就会不同,因而不同光谱带宽下的分析误差也大相径庭。
分光光度计误差计算方式
分光光度计的分析总误差为杂散光引起的误差和噪声引起的误差之和。紫外分光光度计分析测试的总误差除了包括杂散光和噪声(含基线平直度)引起的误差,还有光谱带宽、波长准确度、试样配制和操作等引起的误差。因此,总误差应是杂散光、噪声、基线平直度、光谱带宽、波长准确度、试样配制和操作等多种误差的总和。
以上误差计算方法简单、直观,仪器设计者或分析工作者只要根据自己估算或实际测试的数据(或假设的数据),结合紫外分光光度计的性能技术指标(杂散光、噪声、基线平直度、芳宽等),并考虑分析测试者在样品配制、处理、仪器操作等方面的误差,就能估算出仪器对某项分析工作的分析误差,是一种很实用的误差计算方法。